无论是学术大牛还是科研小白,在接触一个新课题时,往往是三个步骤:首先,阅读大量相关文献,设计出自己的实验方案。然后,摸索预实验,获得一些经验和数据。根据这些资料,决定是否推进正式试验。其中,很重要的预实验不仅能节约实验经费,减少人力物力支出,重要的是,能让你在做正式试验时「手儿不抖,稳如老狗」。因此,给大家分享一下如何摸索自己的预实验。首先,预实验必须要当做正式实验来对待(态度要放端正,这是必须的)。预实验的每一步都需要详细规划,多方筹谋。不论是实验动物的选择,还是检测试剂的购买,都尽量和正式实验统一标准。建议大家先把所有试剂和药物购买完毕后,再去购买实验动物。因为动物会长胖,长胖后给药剂量就要增加,不仅多花钱,并且还容易影响实验效果。笔者曾经提前将实验动物买回,但因为特殊原因没能购买到造模药物,终只能忍痛割爱将动物赠送他人,白白亏了一笔血汗钱(那批老鼠在我这儿白吃白喝长得太胖,没办法用作造模)。动物及试剂购买首先需要考虑:实验动物品种、体重、性别、周龄(通常根据既往文献报道可以获得答案)、数量(需要考虑到实验有一定动物死亡率或者动物本身会打架互殴,因此需要提前购买足够的动物)。查阅已有的相关小鼠模型综述文献。崇明区疾病动物模型建模
具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对发明作进一步阐述。本发明构建了pirb基因敲入的小鼠动物模型,将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内。具体来说,构建一个cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒,将其克隆进入rosa26基因的内含子1中。rosa26基因(ncbireferencesequence:)位于小鼠的七号染色体。本发明pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法,具体按照以下步骤具体实施:步骤1、根据小鼠rosa26基因(genebank:))序列,利用cas-desigher软件在1号内含子设计grna靶序列,并搜索小鼠dbm-db基因组数据库基因,采用crispr脱靶效应软件cas-offinder检测潜在的脱靶位点:**终选取两个grna,grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如:seqid**:ggcaggcttaaaggctaacctgg将grna1和grna2分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构;步骤2、利用c57bl/6小鼠文库bac克隆,通过pcr扩增获得pirb基因cds的同源臂,采用in-fusion方法构建含有cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒的质粒打靶载体,通过酶切、pcr及测序对打靶质粒载体进行验证,图1为构建好的pirb基因打靶载体的示意图。徐汇区心血管疾病疾病动物模型建模小鼠疾病模型研究也是人相关疾病药物研发的起点。
可复制临床上一些疾病不常见,如放射病、毒气中毒、烈性传染病、外伤等。还有一些如遗传性、免疫性、代谢性和内分泌、血液等疾病,发展缓慢、潜伏期长,病程也长,可能几年或几十年,在人体很难进行3世代以上的连续观察。人们可有意选用动物种群中发病率高的动物,通过不同手段复制出各种模型,在人为设计的实验条件下反复观察和研究,甚至可进行几十世代的观察,同时也避免了人体实验造成的伤害。折叠意义2可按需要取样动物模型作为人类疾病的"复制品",可按研究者的需要随时采集各种样品或分批处死动物收集标本,以了解疾病全过程,这是临床难以办到的。
动物模型名称:皮肤浅II°及深II°烫伤大鼠模型2、实验动物种属:SD大鼠3、实验动物性别:雌雄不限4、实验动物年龄:成年5、实验动物体重:160-200g6、实验动物环境:SPF级1、实验方法:热力致皮肤损伤法。麻醉大鼠,根据体重腹部备皮,然后固定于实验台上。将大鼠移近加热纯净水的烧杯,将纱布条浸入热水中,待水温恒定于99℃时,取出纱布,立即平铺于待烫部位,于纱布接触大鼠皮肤后开始计时。致伤3s为浅II°烫伤,致伤10s为深II°烫伤。2、检测标准:a.皮肤大体观察:致伤3s大鼠局部皮肤发红、轻微水肿。愈合后毛发生长良好,有少量红褐**素沉着,皮肤轻微挛缩,表皮光滑;致伤10s大鼠局部皮肤发白、水肿。愈合后毛发生长良好,皮肤瘢痕形成,表面粗糙不平。b.皮肤组织病理学观察:致伤3s大鼠表皮层次尚清楚,细胞明显肿胀、变性,层次结构尚清楚,细胞核结构不清;致伤10s大鼠表皮细胞部分脱落,结构不清,明显变性、坏死,部分细胞已溶解。什么是疾病动物模型建模?
自发性**动物模型:未经人为处理;自然发生;自发性**的总体评价--动物自发性**的病因往往是由动物的遗传特性决定的与人痒的病因有较大距离。各动物**生长速度差异较大很难在限定时间内获得大量生长均匀的荷瘤动物(tumor-bearinganimals)。因此,自发性**动物模型很少在抗**药物的常规筛选中广泛应用。2、诱发性**动物模型:在实验条件下:使用致*物(carcinogens);诱发动物发生**animalmodelofinducedtumor)指使用致*因素(carcinogens)在实验条件下诱发动物发生**的动物模型,它是进行实验**学研究的常用方法。常用于验证可疑致*因素的作用也越来越多地应用干**发生机理的研究及防治效果的观察上,在**病因学、遗传学、生物学等方面的研究中有重要地位。由于诱发因素和条件可人为控制,诱发率远高于自然发病率故在**实验研究中优于自发瘤。用于诱发实验性**的动物种类很多,它们因种族不同而对相同致*因素有不同的反应性。常用的动物以哺乳动物为主,其中啮齿类动物的使用**多,应用**广,包括各种大鼠、小鼠、际鼠等。。验性动物模型是指研究者通过使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物。青浦区正规疾病动物模型建模
可以克服人类某些疾病潜伏期长,病程长和发病率低的缺点。崇明区疾病动物模型建模
1、动物模型名称:橄榄油联合酒精致肝硬化门脉高压大鼠模型2、实验动物种属:SD大鼠3、实验动物性别:雄性4、实验动物年龄:5周5、实验动物体重:150g-180g6、实验动物环境:SPF级1、实验方法:橄榄油联合酒精诱导。按0.3mL/100g体重,背颈部皮下注射50%CCl4的橄榄油溶液,***注射量加倍(6mL/kg体重),2次/周,皮下注射共13周;造模前4周为10%酒精溶液喂养代替饮水,4周后改为30%酒精溶液灌胃(30%酒精溶液灌胃1mL/100g体重,3次/周)。继续正常饲养1个月。实验结束测量门静脉血流量(PBF)和肠系膜上动脉血流量(SMABF)。处死,取肝脏进行组织病理学检查。崇明区疾病动物模型建模
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